Na₂MoO₄.2H₂O

۱۷۰
۲/۶
۲۵/۰

محلول ذخیره آهن
FeSO₄.7H₂O
Na₂EDTA

۸/۲۷
۲۲/۳۷

۲-۲-۳- محلول­های ذخیره مواد تنظیم­کننده ­رشدی
برای تهیه محلول­های ذخیره IBAو IAA مقدار ۰۱/۰ گرم از این اکسین­ها را وزن کرده و در محلول ۱ نرمال NaoH حل کرده، سپس با آب مقطر به حجم ۱۰ میلی­لیتر رسانیده شد.

( اینجا فقط تکه ای از متن فایل پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

برای تهیه ۱۰ میلی­لیتر محلول ذخیره TDZ و BAPمقدار ۰۱/۰ گرم از هورمون را وزن کرده و در محلول ۱ نرمال KOH حل کرده و سپس حجم آن به ۱۰ میلی­لیتر افزایش پیدا کرد. حجم برداشتی با بهره گرفتن از رابطه N₁V₁=N₂V₂ قابل محاسبه می­باشد. محلول­های ذخیره را می­توان به مدت چند ماه در یخچال نگهداری کرد. این محلول­ها در طولانی مدت در اثر واکنش­های فتوشیمیایی از بین می­روند.
۳-۲-۳- محلول ذخیره کیتوسان
۲ گرم کیتوسان (C₁₂H₂₄N₂O₉) تهیه شده از شرکت Sigma را در اسید استیک حل کرده، پس از حل شدن کامل به حجم یک لیتر افزایش پیدا کرد . بدین ترتیب محلول ppm 2000 کیتوسان به دست آمد و از این مقدار ۲۰ میلی لیتر (۴۰ میلی­گرم در لیتر) برای هر لیتر محلول اضافه گردید.
۴-۲-۳- سایر مواد
موادی از قبیل ساکارز و آگار که با مقادیر زیاد مورد استفاده قرار می­گیرند، در هنگام تهیه محیط کشت مستقیماً به محیط کشت اضافه می­شوند. در این پژوهش ساکارز به مقدار ۳۰ گرم در لیتر و آگار به عنوان سفت کننده محیط کشت به مقدار ۸ گرم در لیتر مورد استفاده قرار گرفت.
۳-۳- ضدعفونی بذر
به دلیل برخی آلودگیهای قارچی و باکتریایی در آزمایشات اولیه و نیز به علت جوانه­زنی کم و غیر یکنواخت بذور، روش های مختلف ضدعفونی بذر مورد استفاده قرار گرفت. ابتدا بذور با الکل اتانول ۷۰ درصد به مدت ۱ دقیقه و سپس با هیپوکلریت سدیم در غلظت­های (۱ و ۵/۲ درصد) به مدت ۱۰ دقیقه استریل و سپس ۳ بار در آب مقطر استریل جمعاً به مدت ۱۰ دقیقه غوطه­ور شدند. سپس زمان­های مختلف استریل­کردن (۲، ۵، ۸، ۱۰، ۱۲ و ۱۵ دقیقه) با هیپوکلریت ۱ درصد مورد آزمایش قرار گرفت.
۴-۳- کاشت بذر و شرایط نگهداری
بذور ضدعفونی شده با اتانول ۷۰ درصد به مدت ۱ دقیقه و هیپوکلیت سدیم ۱ درصد به مدت ۵ دقیقه، در زیر هود لامینار و با بهره گرفتن از پنس­های استریل­شده در داخل اتوکلاو، به محیط­های کشت مختلف انتقال داده شدند.. در داخل هر پتری دیش تعداد ۲۵ عدد بذر کشت گردید. بذرها پس از انتقال به پتری دیش­ها در دمای ^˚ C 2± ۲۴ و دوره نوری ۱۶ ساعت روشنایی و ۸ ساعت تاریکی در اتاق رشد پژوهشکده زیست­ فن­آوری دانشگاه ارومیه نگهداری شدند.

تهیه ریزنمونه
در این آزمایش از ریزنمونه­های مختلف (گره، نوک شاخه، هیپوکوتیل و کوتیلدون) استفاده شد. ریزنمونه ها از گیاهچه­های حاصل از کشت بذور ضدعفونی شده در شرایط استریل بدست آمد. قطعات هیپوکوتیل و کوتیلدون ۱۰ روز پس از کشت بذر و قطعات ۵ میلی­متری گره و نوک شاخه ۱۶ روز پس از کشت بذر از گیاهچه های حاصل بدست آمد (شکل ۱-۳).

B
A
D
C
شکل ۱-۳: ریزنمونه­های تهیه شده از گیاهچه­های حاصل از کشت بذور ضدعفونی شده در شرایط استریل. A: ریزنمونه گره. B: ریزنمونه نوک شاخه. C: ریزنمونه کوتیلدون. D: ریزنمونه هیپوکوتیل.
۶-۳- آزمایش ۱: تعیین اثر محیط کشت در جوانه­زنی بذور گیاه مریم­گلی­کبیر
در این آزمایش ۵ محیط مختلف به منظور بهینه­سازی جوانه­زنی بذر مریم­گلی­کبیر مورد بررسی قرار گرفت. محیط ها شامل آب – آگار(WA)، محیط MS حاوی ۳ درصد ساکارز و ۸/۰ درصد آگار، کاغذ صافی استریل مرطوب شده با آب استریل (WFP) و محیط MS حاوی غلظت­های مختلف کیتوسان (۴۰، ۶۰ و ۸۰ میلی­گرم در لیتر) بودند. pHهمه این محیط­ها با سود ۱ نرمال در ۸/۵ تنظیم گردید و بالاخره محیط کشت MS با pH های مختلف (۸-۷، ۷-۶، ۶-۵) نیز در این پژوهش مورد بررسی قرار گرفت.
۷-۳- آزمایش ۲: بررسی اثر نوع ریزنمونه و محیط کشت بر القاء جوانه و باززایی شاخساره مریم­گلی­کبیر
برای بررسی اثر نوع ریزنمونه بر القای جوانه و باززایی شاخه، ریزنمونه­های مختلف شامل (گره، نوک شاخه، هیپوکوتیل و کوتیلدون) در محیط­های کشت MS تکمیل شده با ۴۰ میلی­­گرم در لیتر محلول کیتوسان، ۳۰ گرم ساکارز، ۸ گرم آگار و غلظت­های مختلف (۰، ۲/۲، ۴/۴ و ۸/۸ میکرومولار) سایتوکینین­های BAP، Kin و TDZ که به طور جداگانه به محیط­های کشت اضافه شده بودند، قرار گرفتند. پس از ۹ هفته و انجام ۳ واکشت داده­برداری انجام گردید و نتایج مورد ارزیابی قرار گرفت.
۸-۳- آزمایش۳: بررسی اثر نوع و ترکیبات هورمونی بر القاء جوانه و باززایی شاخساره مریم­گلی کبیر
برای بررسی اثر نوع و ترکیبات هورمونی بر القای جوانه و باززایی شاخه از محیط کشت MS همراه با سه نوع تنظیم­کننده رشد سیتوکینینی (BAP, TDZ, Kin) در چهار غلظت (۰،۲/۲، ۴/۴و ۸/۸ میکرومولار) در ترکیب با IAA در دو غلظت (۰ و ۱/۱ میکرومولار) استفاده گردید (جدول ۲-۳). ریزنمونه­های گره و هیپوکوتیل در این محیطها قرار گرفتند. پس از ۹ هفته و انجام ۳ واکشت، داده­برداری انجام گردید و نتایج مورد ارزیابی قرار گرفت.
جدول ۲-۳: ترکیبات مختلف تنظیم­کننده­ های رشد گیاهی مورد استفاده در القای جوانه و باززایی شاخساره از ریزنمونه­های مورد استفاده در مریم­گلی­کبیر

IAA (µM)
۱/۱ ۰

Cytokinin (µM)