رقم ۲

۹۱/۳

۴۱/۴

۱/۲

۱۰/۱۱

( ۵ %) LSD

رقم ۱: ’Rendz-Vous‘
رقم ۲: ’ Panamera‛

۴-۶- تاثیر مدت زمان هم کشتی بر کارایی انتقال ژن

به طور کلی دوره هم کشتی ۲ تا ۴ روز برای انتقال ژن با بهره گرفتن از ریزنمونه های مختلف به میخک در نظر گرفته می شود که پس از آن رشد بیش از حد باکتری می تواند یک مشکل بزرگ باشد. طولانی کردن زمانی که باکتری با بافت های گیاهی در حضور آنتی بیوتیک در تماس است اثرات متفاوتی بسته به گونه گیاهی می تواند داشته باشد.

( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

در این پژوهش اثرهای مختلف مدت زمان هم کشتی (۲، ۳ و ۴ روز) بر کارایی انتقال ژن مقایسه شد. نتایج این بررسی نشان می دهد که برای هر دو رقم مورد بررسی بیشترین تعداد شاخساره های تراریخت در مدت زمان هم کشتی سه روزه به دست آمد و رقم استاندارد‘Rendz-Vous‘ نسبت به رقم مینیاتور ’Panamera‘در مدت زمان های هم کشتی مورد بررسی گیاهان تراریخت بیشتری تولید نمود و کارایی انتقال ژن بالاتری نسبت به رقم دیگر داشت. اختلاف بین دو رقم در میزان باززایی و کارایی تراریزشی می تواند به وسیله اندازه کوچکتر ریز نمونه های برگ در رقم مینیاتور ’Panamera‘ نسبت به رقم استاندارد ’ Rendz-Vous‘شرح داده شود.
در این پژوهش فراوانی تراریزشی بهینه زمانی که ریز نمونه های برگ برای مدت سه روز با اگروباکتریوم هم کشت شده بودند به دست آمد. در حالی که هم کشتی طولانی تر(۴ روز) فراوانی انتقال ژن را افزایش نداد و دوره های کوتاه تر (۲ روز) منتج به کاهش فراوانی تراریزش شد (جدول ۶-۴).
مدت زمان هم کشتی به نسبت کوتاه ۲ یا ۳ روزه به عنوان مدت زمان بهینه در گل میمون^[۶۳] (Holford et al, 1992) و توتون^[۶۴] (Uranbey et al, 2005) گزارش شده است. نتایج را می توان این گونه توجیه نمود که گسترش بیشتر مدت زمان هم کشتی به سبب رشد بیش از حد باکتری^[۶۵] ، فراوانی انتقال ژن را کاهش می دهد که اثرهای زیان آوری بر توانایی باززایی^[۶۶] ریزنمونه ها می گذارد. در بررسی حاضر، هم کشتی به مدت ۴ روز یا بیشتر منجر به رشد بیش از حد باکتری و سوختگی بافت ها^[۶۷] شد. هم کشتی به مدت ۲ روز به علت عدم تشکیل هاله باکتری اطراف تعداد بیشتری ریزنمونه منجر شد. بنابراین یک دوره هم کشتی ۳ روزه برای بهبود سیستم تراریزشی این دو رقم میخک بهینه می باشد.
فیروزآبادی و همکاران (Firoozabady et al, 1995) برای تراریزشی ریزنمونه های برگ ارقام مختلف میخک با Agrobacterium tumefaciens strain EHA مدت زمان هم کشتی ۵ روز را به کار بردند.
از جمله مشکلات دیگر افزایش مدت زمان هم کشتی رشد بیش از حد باکتری می باشد که کنترل و حذف بعدی آن توسط آنتی بیوتیک سفاتاکسیم را مشکل می نماید و در صورتی که باکتری زیاد رشد نموده باشد مدت زمان بیشتری برای شستشوی ریزنمونه ها با سفاتاکسیم نیاز است و این میتواند با توجه به اثرات جانبی این آنتی بیوتیک ریزنمونه ها را ضعیف نموده و توانایی باززایی بعدی آن ها را کاهش دهد.
جدول۶-۴- مقایسه تعداد و درصد شاخساره های تراریخت به دست آمده در مدت زمان های هم کشتی مختلف ریز نمونه ها با باکتر.ی

تعداد و درصد شاخساره های تراریخت

تعداد کل شاخساره های باززایی شده

تعداد ریز نمونه های باززایی شده (در صد)

تعداد ریز نمونه ها

ارقام

مدت هم کشتی (روز)

۱۴/۷(۲)

۲۸

۶۸/۱۲(۱۷)

۱۳۴

رقم ۱

۲

۸۹/۶(۲)

۲۹

۱۳/۱۳(۱۸)

۱۳۷

رقم ۲