در مطاله دیگر که در اسپانیا و در سال ۲۰۱۱ توسط M.J. Citores و همکارانش انجام شد، ارتباط رد حاد پیوند کبد در بیماران پیوند کبدی که به علت آلودگی با ویروس هپاتیت C مجبور به پیوند کبد شده اند با ده چند شکلی در ژن گیرنده TLR(TLR1-10) مورد بررسی قرار گرفت که نتایج حاصل نشان داد که تنها چند شکلی در ژن^[۳] TLR3 با رد حاد پیوند کبد در ارتباط است ( Citores M et al, 2011).
طی مطالعه ای که در سال ۲۰۱۳ در چین توسط Zhijun Jiang و همکارانش انجام شد رابطه چند شکلی آنتی ژن ۴ لنفوسیت T کشنده(CTLA-4) با خطر رد حاد پیوند کبد مورد بررسی قرار گرفت که نتایج آن نشان داد که این چند شکلی رابطه معناداری با رد حاد پیوند کبد ندارد ( Jiang Z et al, 2013).
در سال ۲۰۱۲ در ایتالیا توسط Bitetto D و همکارانش مطالعه ای در بین افرادی که بافت کبد پیوندی دریافت کرده بودند برای یافتن ارتباط بین رد حاد پیوند کبد با چند شکلی در ژن انترلوکین۲۸(IL-28B) انجام دادند. نتایج این بررسی نشان داد که اختلاف معناداری در بین افرادی که بافت کبد پیوندی آنها رد شده و آنهایی که رد حاد صورت نگرفته در ژنوتیپ اینترلوکین۲۸ وجود دارد ( Bitetto D et al, 2012).

( اینجا فقط تکه ای از متن پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

در سال ۲۰۱۳ در نیویورک توسط Sridhar R. Allam و همکارانش بررسی برای یافتن ارتباط بین بقای بافت پیوندی در افراد دریافت کننده پیوند کبد با چند شکلی در ژن اینترلوکین ۲۸(IL-28B) صورت گرفت که طی آن مشخص شد ارتباط معنا داری وجود دارد و حضور آلل C باعث افزایش بقای بافت کبد پیوندی در گیرندگان کبد می شود ( Allam RS et al, 2013).
Xiaobo Yu و همکارانش در سال ۲۰۱۴ در چین به بررسی ارتباط چند شکلی فاکتور ۵ تنظیمی اینترفرون(IRF5) و رد حاد پیوند کبد پرداختند که در این رابطه به این نتیجه دست یافتند که چند شکلی در این ژن ارتباط معنا داری با رد حاد پیوند کبد دارد و ژنوتیپ GG در معرض ریسک رد حاد پیوند کبد می باشد ( Yu X et al, 2014).
Uesugi M و همکارانش در سال ۲۰۱۴ در ژاپن مطالعه ای برای یافتن ارتباط بین رد حاد پیوند کبد و چند شکلی در ژن سیتوکروم P450(CYTP3A5) انجام دادند. طی این مطالعه مشخص شد که ارتباط معناداری بین این چند شکلی و خطر رد حاد پیوند کبد وجود ندارد ( Uesugi M et al, 2014).
فصل سوم
روش کار
۳-۱ نمونه گیری:
در این طرح، مطالعه بر روی ۲۱۷ نفر از بیماران پیوند کبد در مرکز پیوند بیمارستان نمازی شیراز طی سال­های ۹۳-۱۳۹۲ انجام شد که از این تعداد ۱۴۴ نمونه خون کامل و ۷۳ نمونه بافی­کت بود. DNA را از نمونه­های خون به روش Boiling و از نمونه­های بافی­کت با بهره گرفتن از کیت DNP متعلق به شرکت سیناژن استخراج کردیم. نمونه­های کنترل نیز به تعداد ۲۱۷ نمونه در این مطالعه وارد گردید. در نهایت یک مطالعه مورد-شاهدی بین افراد سالم و بیماران پیوند کبد و یک مطالعه آینده نگر(Cohort) بین بیماران پیوند دارای رد حاد و فاقد رد حاد انجام شد. جدول ۳-۱مشخصات این بیماران را نشان می­دهد. در این مطالعه رد حاد پیوند به افرادی اطلاق می­گردد که در طول ۶ ماه اول پیوند با بیوپسی (نمونه برداری از بافت) رد حاد آن ها تایید شده­است.
جدول۳-۱: مشخصات گروه شاهد و کنترل

مشخصات
سالم
بیماران پیوند کبد

تعداد کل
میانگین سن

۲۱۷
۳۱/۱۰ ±۰۹/۳۰

۲۱۷
۲۶/۱۸±۵۵/۳۳

۳-۲ وسایل مورد نیاز
وسایل استفاده شده در این پروژه شامل:
سمپلر(Socorex)، ترازو، میکرو سانتریفیوژ (Hettich)، ورتکس (Scientific industries INC)، اتوکلاو (ریحان طب)، مایکروفر (بوتان)، دستگاه ترموسایکلر (Techne)، Hot plate(Techne)،Rotator (پدیده نوژن پارس)، PH-meter(Metrohm)، Electrophoresis (تانک الکتروفورز و منبع تغذیه جریان الکتریکی پایاپژوهش)، دستگاه Gel documentation(UvitecCambridge).
۳-۲-۱ محلول­های استفاده شده جهت استخراج DNA از نمونه خون کامل
محلول­های استفاده شده شامل:
NaOH (50 میلی مولار)، TrisHCl (1 مولار)، محلول NH4Cl (170 میلی مولار)، محلول NaCl-EDTA (10 میلی مولار) می باشد که از طریق روش گفته شده در کتاب Molecular Cloning: A Laboratory Manual تهیه شدند (Green MR et al, 2012).
۳-۲-۲ محلول­های استفاده شده جهت استخراج DNA از نمونه بافی کت
پروتئاز mg/ml 20 (proteinase K)، Lysis Solution، Wash Buffer (Ethanol Base) Precipitation Solution(Isoprppanole Base)،Solvent Buffer
۳-۲-۳ مواد لازم جهت انجام PCR
Taq DNA Polymerase (سیناژن)، dNTPs (سیناژن)، MgCl2 (سیناژن)، بافر ۱۰x(10x buffer) مخصوص PCR(سیناژن) و پرایمر های رفت و برگشت ژن CAT و NQO1 (سیناژن)
۳-۲-۴ مواد لازم جهت انجام الکتروفورز
بافرTBE، محلول اتیدیوم بروماید (x1000)، Tris Base (سیناژن)، Boric acid (Merck)، EDTA (Merck) 6xloading buffer (سیناژن)، Agarose(Invitrogen)، ۱۰۰bp DNA ladder (Vivantis).
۳-۲-۵ مواد استفاده شده جهت اثر دادن آنزیم محدود کننده
آنزیم محدود کنندهHinf1 و EcoRV(Fermentas) و بافرEcoRV و بافرv3
۳-۳ استخراج DNA از خون محیطی